白花蛇舌草含有环烯醚萜类、三萜类、蒽醌类、*酮类、有机酸类、甾醇类以及苯丙素类等活性成分,还含有锡、锰、锌、锶、铬等微量元素。现代药理研究已证实白花蛇舌草可通过抑制肿瘤细胞生长、诱导肿瘤细胞凋亡等发挥抗肿瘤作用,具有免疫调节、抗炎、抗菌、抗氧化、抗病*等作用。目前,白花蛇舌草质量控制研究集中在萜类成分齐墩果酸、熊果酸和对香豆酸的含量测定,其它成分如芦丁、槲皮素、去乙酰车叶草酸甲酯、6-O-对香豆酰鸡屎藤苷甲酯等亦有报道,但同时测定白花蛇舌草中对香豆酸和芦丁还未见报道。对香豆酸为酚酸类成分,芦丁为*酮类成分,两者均具有抗氧化、抗炎、抗肿瘤等作用。笔者在前人研究的基础上建立了高效液相色谱(HPLC)法同时测定白花蛇舌草中对香豆酸和芦丁含量,该方法准确度高、分离度好、操作简单,并对12批白花蛇舌草饮片中对香豆酸和芦丁的含量进行了测定和比较,为白花蛇舌草饮片的质量控制提供了实验依据。
01
主要仪器与试剂
高效液相色谱仪:LC–20AT型,二极管阵列检测器,LCsolution工作站,岛津企业管理(中国)有限公司。数控超声波清洗器:KQ–GDV型,昆山市超声仪器有限公司。高速万能粉碎机:FW型,天津市泰斯特仪有限公司。电子天平:MSTS型,感量为0.01mg,瑞士梅特勒–托利多仪器公司。对香豆酸对照品:批号为–,以99.3%计,中国食品药品检定研究院。芦丁对照品:批号为080–,以91.7%计,中国食品药品检定研究院。甲醇:色谱纯,安徽天地高纯溶剂有限公司。实验用水为纯净水。实验用其余试剂均为分析纯。
02
仪器工作条件
色谱柱:KromasilC18柱(mm×4.6mm,5μm,瑞典Nouryon公司);流动相:甲醇–0.1%磷酸溶液(体积比为30∶70);检测波长:nm(对香豆酸)、nm(芦丁);流量:1.0mL/min;柱温:30℃;进样体积:10μL。
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实验方法
取白花蛇舌草粉末(过3号筛)约1.0g,精密称定,至具塞锥形瓶中,精密加入甲醇25mL,密塞,称定重量,超声处理(W,频率40kHz)30min,放冷,再称定质量,用甲醇补足减失的质量,摇匀,滤过,取续滤液,即得。
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测定结果
对香豆酸的质量浓度在2.11~12.66μg/mL范围内与其色谱峰面积具有良好的线性关系(r=1.?0);芦丁的质量浓度在8.34~50.02μg/mL范围内与其色谱峰面积具有良好的线性关系(r=1.?0)。对香豆酸、芦丁的平均回收率分别为94.01%、91.05%。对香豆酸、芦丁6次测定结果的相对标准偏差分别为1.60%、1.16%。
节选自《化学分析计量》年第30卷第6期
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